Número Atual:  Janeiro-Março 2020 - Volume 4  - Número 1

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  • Francisca das Chagas Sobral Silva, Daniel Vasconcelos Silva, Anderson Bruno Matos, Andrea Medeiros Salgado, Maria Queiroz da Cruz

Artigo Original

Avaliação da ação de agentes precipitantes na obtenção de proteínas alergênicas presentes em extratos brutos de ácaros

Evaluation of the action of precipitating agents to obtain allergenic proteins from crude mite extracts

Francisca das Chagas Sobral Silva^1,2, Daniel Vasconcelos Silva², Anderson Bruno Matos², Andrea Medeiros Salgado¹, Maria Queiroz da Cruz²

1. Federal University of Rio de Janeiro, Chemical Engineering Department - Rio de Janeiro, RJ, Brazil
2. Allergenic Extracts Laboratory, Research and Development - Rio de Janeiro, RJ, Brazil

Endereço para correspondência:

Francisca das Chagas Sobral Silva
E-mail: franciskasobral@gmail.com

RESUMO

INTRODUÇÃO: As proteínas alergênicas presentes nos extratos dos ácaros de poeira, tais como Dermatofagoides farinae (DF), Dermatofagoides pteronyssinus (DP) eTyrophagus putrescentiae (TP) são relevantes para estudos científicos na área de alergias e aplicação em imunoterapias. A precipitação/concentração desses extratos proteicos pode favorecer a agregação de alérgenos nos homogenatos.
OBJETIVO E MÉTODO: O trabalho investiga o processo de precipitação, submetendo os extratos brutos de ácaros de poeira a compostos como sulfato de amônio (NH₄)₂SO₄, ácido tricloroacético (ATC) e acetona.
RESULTADOS: Os melhores resultados foram obtidos por fracionamento com (NH₄)₂SO₄ em 80% (m/v) de saturação (~ 0°C), observando as marcações proteicas no gel de eletroforese. Os alérgenos principais foram identificados por immunoblot em 25 kDa (cisteína protease) para Der f 1 e Der p 1; e 25 kDa, 33 kDa (tropomyosin), 11 kDa para Tyr. Para esse percentual, os teores de proteína total foram de 12.83 mg mL^-1 para DF; 24,78 mg mL^-1 para DP; e 27,35 mg mL^-1 para TP.
CONCLUSÃO: A vantagem da precipitação com (NH₄)₂SO₄ frente à precipitação com acetona foi a possibilidade de gradativamente se obter frações proteicas, o que não acontece quando utilizado esse solvente. A adição de 80% (v/v) de acetona aos extratos de ácaros favoreceu a precipitação total de proteína nas concentrações 16,42 mg mL^-1; 28,47 mg mL^-1; e 13,41 mg mL^-1. O uso de ATC em concentrações acima de 20% (m/v) forma peptídeos que não são retidos no gel nas condições experimentais estabelecidas, sendo eficiente soluções mais diluídas desse ácido.

Descritores: Ácaros, proteínas, alérgenos, tipos de precipitação.